中药抗胃癌转移机理实验研究进展_药学论文

中药抗胃癌转移机理实验研究进展_药学论文

【医药论文】导语，我们所欣赏的这篇文章共有45813文字，由章洁波细致改进，上传在作文站。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质（如病菌等），或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。抵抗或防止微生物或寄生物的感染或其它所不希望的生物侵入的状态。免疫涉及特异性成分和非特异性成分。非特异性成分不需要事先暴露，可以立刻响应，可以有效地防止各种病原体的入侵。特异性免疫是在主体的寿命期内发展起来的，是专门针对某个病原体的免疫。中药抗胃癌转移机理实验研究进展_药学论文要是你对这文章有什么独特的建议，也可以上传分享给大家！

第一篇 中药抗胃癌转移机理实验研究进展_药学论文

             作者：肖中海,李勇进,魏品康 

【关键词】  胃癌；中药；分子机制；综述

胃癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,为消化系统最多发的肿瘤,病死率在我国农村居于恶性肿瘤病死率的首位,在城市仅次于肺癌[1]。近年来,由于手术方法的改进和新放化疗方案的应用,使胃癌的治愈率有所提高,但因早期胃癌诊断率低,患者在诊断时往往已有淋巴结受累或转移,成为影响疗效及预后的主要因素。目前,探讨胃癌转移的机制,寻求抗胃癌转移新靶点已成为医学界研究的热点；与此同时,研究人员在该领域对中药也进行了许多相关研究。笔者现将近年来有关中药抗胃癌转移的分子学机制实验研究综述如下。

　1  对癌基因、抑癌基因表达的影响

癌基因激活和抑癌基因失活是肿瘤发生、发展和转移的根本原因。目前,在胃癌发生和转移中研究较多的有ras、c-erbb-2、ets、c-myc等原癌基因和nm23转移抑制基因以及p53、p16、p27、rb、pcna抑癌基因等,其中p53基因表达与胃癌的淋巴结和远处转移密切相关。p53基因有野生型和突变型两种,野生型p53基因的功能是抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的发生,而突变型p53能抑制野生型p53活性,引起细胞转化,促进细胞癌变。WWw.meiword.cOm在对单味中药和中药复方的实验研究中发现,斑蝥酸钠[2]、姬松茸茵孢多糖[3]、半夏泻心方[4]、益气活血中药[5]、三物白散加味方[6]等均能显著下调胃癌组织中p53(突变型)的表达。梁氏等[7]以三氧化二砷作用于体外培养的人胃癌细胞株,其后运用免疫组化技术对cd44、p53、nm23、h-ras、pcna基因编码蛋白的表达情况进行检测,结果显示,三氧化二砷可明显下调上述基因编码蛋白表达水平,说明某些中药可以通过调节p53的表达而抑制胃癌的生长及转移。c-erbb-2基因是表皮生长因子受体家族成员之一,c-erbb-2可使e-cad介导的细胞粘附作用受到抑制,进而促进胃癌的侵袭及转移。陈氏等[8]在探讨消痰散结方抑瘤抗转移作用机理时,发现对sgc-7901胃癌组织中ras及c-erbb-2癌基因的mrna表达有明显下调作用。陈氏[9]应用免疫细胞化学法及流式细胞仪癌平口服液含药血清对人胃癌细胞癌基因c-erbb-2表达的调控作用,发现能有效抑制癌基因c-erbb-2的表达,对癌基因c-erbb-2表达的有效调控是中药抗胃癌转移的机制之一。p16蛋白的低表达与胃癌的分化程度、浸润扩散和淋巴结转移有关,p16蛋白表达缺失导致了肿瘤细胞增殖活性增强,分化受阻,是胃癌进展和转移的重要因素[10]。张氏等[11]发现,胃炎消能使胃癌癌前病变中的抑癌基因p16 mrna的表达上调,说明中药能通过调节p16的表达减弱肿瘤细胞的转移能力。

2  对细胞粘附分子的影响

肿瘤细胞的粘附性在肿瘤浸润和转移中起着极为重要的作用,包括肿瘤细胞自身之间的连接、肿瘤细胞与其他类型细胞的粘附,其中粘附分子中免疫球蛋白超家族成员(icam-1)、cd44、e-选择素(e-selectin)、整合素β1(integfin β1)与胃癌的转移密切相关。cd44分子为单一基因编码,cd44分子在胞外区存在一个可变区,一般将不含可变区的cd44分子称为标准cd44(cd44s),而将含有可变区的cd44分子称为变异型cd44(cd44v)。cd44v主要表达于癌细胞,促进癌细胞的粘附和运动,尤其在促进淋巴结转移及浸润深度方面起十分重要的作用,其中cd44v6强阳性仅在有转移的进展期胃癌中出现。陈氏等[12]研究蚯蚓纤溶酶对人胃癌细胞株mgc803的增殖抑制作用以及对胃癌细胞与血管内皮细胞粘附性和粘附分子cd44v6表达的影响时发现,蚯蚓纤溶酶有抑制胃癌细胞增殖的作用,并可降低胃癌细胞与血管内皮细胞的粘附性、降低胃癌细胞粘附分子cd44v6的表达,提示蚯蚓纤溶酶可能具有潜在抗肿瘤转移作用。此外,实验研究发现,消痰散结方[13]、胃泰胶囊[14]、小檗碱[15]、复方苦参注射液[16]等也能下调胃癌组织中cd44v6蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力。icam-1是一种分子量为80～90 kd的单链糖蛋白,其高表达与胃癌的发生、转移有相当密切的关系。唐氏等[17]采用免疫组织化学染色的方法观察胃炎消对胃癌癌前病变细胞间icam-1表达的影响,发现胃炎消能明显降低icam-1蛋白表达的阳性率及表达强度。李氏等[18]采用transwell细胞培养小室建立人肿瘤细胞系体外侵袭模型,动态观察人胃癌细胞系mgc-803、bgc-823对重组基底膜的侵袭作用以及中药复方养胃抗瘤冲剂对胃癌细胞系侵袭作用的影响,同时采用流式细胞仪通过单克隆抗体标记的方法检测侵袭转移相关粘附蛋白cd9、cd31、cd36、cd42a、cd44、cd49d、cd62p、cd41、凝血酶敏感蛋白及cd63的表达,发现养胃抗瘤冲剂可降低部分促进肿瘤转移的粘附蛋白(如cd63、凝血酶敏感蛋白)的表达,对抑制肿瘤转移的粘附蛋白(如cd9)表达有促进作用,从而发挥抗人胃癌细胞侵袭作用。

　3  对细胞外基质的影响

细胞外基质(extracellular matrix,ecm)主要由胶原、糖蛋白、蛋白多糖和氨基葡聚糖等组成,肿瘤细胞的侵袭转移能力与其产生或诱导产生降解ecm的蛋白酶及其抑制物能力有关,其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,mmps)是降解ecm的主要酶系。在胃癌组织中,癌细胞和基质细胞均可表达并分泌mmps。mmps能降解ecm和基底膜,mmps根据其作用的底物不同可分为胶原酶、明胶酶、基质溶解酶、巨噬细胞弹性蛋白酶、膜型金属蛋白酶5类,其中明胶酶类的mmp-2、mmp-9的高表达与胃癌组织的浸润深度、分化程度、淋巴结转移密切相关。研究表明,中药可通过调节mmp-2、mmp-9的表达和蛋白酶活性从而抗胃癌侵袭和转移。吴氏等[19]应用免疫组织化学染色法观察冬凌草甲素对胃癌移植瘤组织中mmp-2、mmp-9表达的影响,发现冬凌草甲素在体内、外能显著抑制胃癌bgc823细胞的生长,减少移植瘤mmp-2、mmp-9的表达。梁氏等[20]在观察胃宁方对人胃癌细胞侵袭能力的影响时发现,胃宁方能显著降低人胃癌细胞mmp-2和mmp-9的含量。冯氏等[21]研究发现,三叶青黄酮能显著抑制sgc-7901细胞的生长,并且具有浓度依赖性,并能降低细胞上清液中mmp-2含量。陆氏等[22]研究苦参素对胃癌细胞株mkn-45产生金属基质蛋白酶mmps的作用时发现,20 μmol/l的苦参素能够显著抑制mmp-2和mmp-9的蛋白酶活性。邢氏等[23]观察到,右旋柠烯可通过下调胃癌细胞mmp-2和上调timp-2的表达抑制其粘附和侵袭。

4  对肿瘤新生血管和淋巴管的影响

肿瘤血管生成是肿瘤细胞生长和转移的基础,肿瘤的血管生成受到肿瘤血管生成促进因子与抑制因子的调节,血管生成促进因子主要包括血管内皮生长因子(vegf)、碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)、血小板源性生长因子(pdgf)等,其中vegf是主要的促血管生成因子,在胃癌的侵袭和转移中起重要作用。研究表明,中药可通过对vegf的表达及活性的调控影响肿瘤的血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移。闵氏等[24]以不同剂量的健脾导滞中药制剂给sd大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和rt-pcr检测不同剂量组胃癌细胞中vegf及其受体flt、kdr的表达情况,结果与对照组相比,vegf及其受体flt在用药组胃癌细胞中的表达减弱,染色变浅,并且与用药剂量有一定的关系。徐氏等[25]研究参麦注射液对胃癌中bfgf和核增殖抗原(pcna)基因表达的影响,结果表明麦冬通过减少肿瘤中pcna和bfgf基因的表达,抑制了肿瘤组织中的微血管密度,进而抑制了肿瘤的生长。研究人员观察到,白藜芦醇、雷公藤内酯醇(tl)可以下调人胃癌细胞sgc-7901细胞vegf的表达,抑制胃癌细胞的增殖而发挥抗肿瘤作用[26-27]。此外,陈氏等[28]发现中药蟾蜍皮、全蝎、露蜂房也能下调小鼠胃癌组织中vegf的表达。

5  对机体免疫功能的影响

机体免疫系统的紊乱与恶性肿瘤的发生和发展有着密切关系,机体的免疫状态是影响肿瘤细胞转移的一个重要因素。参与细胞免疫的效应细胞主要有细胞毒性t细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞,其中t细胞介导的细胞免疫是机体抗肿瘤免疫的主要机制。研究表明,中药可以通过调节免疫而抗肿瘤转移。余氏等[29]研究芪丹煎剂抗胃癌转移的组方配伍合理性及最佳组合,发现芪丹煎剂中的黄芪、丹参、补骨脂和枸杞子能提高fc胃癌小鼠nk细胞活性,抑制胃癌细胞转移。蔡氏等[30]观察到,四君子汤辅助的肠内营养能进一步改善胃癌术后机体的细胞免疫功能及部分体液免疫功能。段氏等[31]研究发现,槐耳多糖在机体内具有提高与促进th和nk细胞回升的功能,从而提高胃癌患者的细胞免疫功能,具有扶正抗癌作用。

　6  存在的问题与展望

中药是非单一成分的天然药物,这种特点决定了其研究方法不能完全照搬西药的研究模式,尤其是药物作用机制研究；同时,胃癌转移是一个多基因调控和多步骤的复杂过程,如果能在多层次、多靶点同时进行干预,从而影响胃癌转移过程中的多个步骤,无疑将是更加合理的选择,而某些研究已显示出中药这方面的优势。笔者认为,进一步的研究或可从以下三方面入手：①横向研究,即研究临床效方对胃癌转移各个步骤的影响,从而筛选可能的作用点；②纵向研究,即对筛选出的有效作用点进行深入的系列研究,以明确对这一通路的作用,揭示作用机制；③中医理论的构建,即在临床及实验研究的基础上,结合传统中医理论,构建胃癌转移的中医理论体系,以指导临床及研究。目前的研究大多停留在第一方面,而中医理论体系的构建尤其薄弱,如若缺乏则势必逐渐失去中医的特色和优势,故应加强第二和第三方面的研究,尤其是中医理论的构建。

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第二篇 甘肃不同产地当归ITS序列分析_药学论文

     作者：楚惠媛,金建文,李海龙,李沛清,陈彻,安方玉 

【摘要】  目的 建立甘肃产当归功效的分子系统学基础,为甘肃产当归“道地性”提供分子依据。方法 采用pcr技术获得its基因,进行测序,经软件进行统计,计算各样本间的遗传距离。结果 甘肃岷、漳两县当归its序列差异极小,在0.000 0～0.008 3之间,岷县5个样品与漳县dg9号样品在586位都为c,589位都为t,而漳县其他3个样品在这2个位点分别为t和g。结论 its序列特征可以作为当归种间鉴别的有效分子标记,当归its序列第586位和589位2个位点碱基可能成为“岷当归”的碱基鉴别位点。

【关键词】  当归；its；序列；道地性；甘肃

abstract：objective to establish the basis of molecular systematics of angelica from different areas of gansu province so as to offer molecular basis of identification gansu-produced angelica with geoherbali. methods the its gene of angelica was obtained by pcr and sequenced to be yzed by dnastar software to calculate the genetic distance among different specimens. results the its sequence of angelica between min county and zhang county of gansu province shows trivial differences with the range of 0.000 0～0.008 3. all 5 min county-produced angelica specimens have same bases at 586 site with “c” and 589 site with “t” with zhang county-produced angelica dg9 specimen, whereas the 586 site and 589 site bases of the other 3 zhang county-produced angelica specimens are “t” and “g” respectively. conclusion the its sequence characteristics can be recognized as effective molecular marker of angelica, and both 586 site base and 589 site base of the its sequence of angelica can be recognized as identification bases of min county-produced angelica.

key words：angelica；internal transcribed spacer；sequence ysis；geoherbali；gansu

当归为伞形科多年生草本植物当归[angelica sinensi (oliv.)diels]的干燥根。WwW.meiword.coM我国当归主产于甘肃东南部,以岷县产量多、质量好,其次为云南、四川、陕西、湖北等省,均为栽培。甘肃产的当归,个大质优,称“秦归”或“西归”,销往全国并大量出口。药材道地性研究已经成为中医药科研的重要课题,但由于道地药材与非道地药材在形态和生药上基本一致,所以传统方法亦不能满足道地药材的现代研究。道地药材是一个地域性现象,其产生除了与栽培方法、生态环境、加工方法有关外,还与物种居群的遗传特异性有关。在植物系统与进化研究中,核酸分子量是最基本的进化单位,能反映进化本质；核酸的基本序列是一元变化的,通常为点突破,趋同效应极小,以核酸分子为指标确定的系统化关系不受主观因素影响。所以,近些年分子鉴定技术在中药研究中不断应用,此方法也已成为中药材道地性研究的重要手段。its序列作为种以下分子鉴定的重要序列,其在中药道地性研究中也得到了广泛研究。

　1  材料与方法

1.1  药材来源

本试验所用药材均为20xx年采自甘肃省岷县及漳县地区农民种植的当归种子,自然干燥后备用,经甘肃中医学院张西玲教授鉴定。见表1。表1  甘肃不同产地当归药材（略）

1.2  its序列扩增

以已经发表于genebank中的当归its序列为标准,设计一对引物,引物序列为：its正,5’-ttgtcgaatcctgcaatagc； its反,5’-tcgaagcgcacagagtatg(引物由上海生物工程技术服务有限公司合成)。pcr反应采用上海生物工程技术服务有限公司提供的即用型pcr扩增试剂盒,反应体系为50 μl,其中2×master 25 μl,上下游引物各5 μl,模板1 l,ddh2o,14 μl。pcr扩增条件：94 ℃预变性1 min,94 ℃变性1 min；53 ℃复性1 min；72 ℃延伸1 min；共35循环,72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。

1.3  基因组dna提取

称取种子100 mg用医用纱布包好,置于液氮中10 min,取出后用研钵研细,用筛网过滤后称取细粉50 mg,然后按照上海生物工程技术服务有限公司生产的uniq-10柱式植物基因组dna抽提试剂盒提取,提取的基因组dna于-20 ℃保存,备用。

1.4  序列测定和

pcr产物经琼脂糖凝胶电泳检测后由上海生物工程技术服务有限公司测序,每个样品均采用双向测序。测序结果以已经发表于genebank中的当归its序定its序列的边界,并进行两端碱基手工修订。各序列特征采用dnastar软件进行统计；dna序列的用dnaman软件排序,排序后的序列采用mega4[1](molecular evolutionary genetics ysis 4)分子进化遗传软件,根据kimura-2参数遗传距离(kimura-2 parameter genetic distance)法计算各样品间的遗传距离值。

2  结果与

2.1  its长度与gc质量分数比较

本实验测得的9样品its(包括5.8s)序列中7样品为600 bp, 2样品为601 bp。所有样品5.8srdna高度一致,无碱基差异。its一区有3个变异位点,its二区有3个变异位点。各样品its序列(包括5.8s)g＋c含量范围在54.1%～54.6%之间。

2.2  基于its各样品间的遗传距离

(见表2)表2  各样品间的遗传距离（略）

　3  讨论

道地药材的形成是特定的基因型,在特定的生境下受到复杂的调控,导致次生代谢过程的关键酶基因的表达产生了时空差异的结果,其形态及次生代谢产物的多样性是由基因的遗传变异引起的[2]。不少学者在研究道地药材分子机理时,都期望能找到决定道地药材的表型的关键酶基因,发现道地药材特定的基因型,但尚未取得突破性进展。its序列作为种以下一级分类群亲缘关系研究的重要基因序列,在中药材道地性研究中也得到了广泛应用。研究发现,海拔高的岷县、宕昌所产当归阿魏酸、挥发油含量显著高于漳县、渭源、定西、陇西当归,岷县当归的阿魏酸、挥发油、水溶性多糖及浸出物含量显著高于漳县产当归[3]。我们采集的9号样品来自漳县贵清山,其产地虽属漳县但因来自山体,其海拔比漳县其他3样品高,与岷县海拔及生长环境接近。我们在对岷、漳两县当归its序列研究时发现各样品间的遗传距离极小,在0.000 0～0.008 3之间,9个样品间的碱基变异位点只有6个,岷县5个样品与漳县9号样品在586位都为c,589位都为t,而漳县其他3个样品在这2个位点分别为t和g,这一结果与两地当归成分研究出现了统一性,因此,我们认为这2个位点碱基可能成为“岷当归”的碱基鉴别位点,不过其可靠性还需进一步研究证实。

【参考文献】

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第三篇 印度在华中药领域专利分析_药学论文

        作者：郭德海,肖诗鹰,刘铜华,刘建勋,张建武 

【关键词】  印度；中药；知识产权；专利

据估算,印度有6 000种以上植物被用于传统民间草药医疗。目前,印度官方现已认定了3 000种以上植物的药用价值；有7 000家左右公司在从事标准化或未标准化的传统医药生产[1]。在印度,传统药物的管理依靠1940年的“药物与化妆品法令”和1945年的“药物与化妆品条例”进行,他们管理着药物和化妆品的进口、制造、发行和销售。1959年,印度承认了印度传统医药的合法性并修正了药物与化妆品法令,以使其包含来自印度传统医药的药物[2]。自1970年印度专利法提出只对生产过程授予专利和实施价格上限机制以来,印度国内的制药业迅速发展。20xx年,印度传统医药销售额约为8亿美元,占世界传统医药销售额的7%左右,是传统医药生产大国[3]。印度制药业得以迅速壮大,与其国内专利法为主的政策调控紧密相关。针对印度在华中药领域专利数据进行,有助于我们了解印度草药科研状况及政策法规的调控影响。

1  数据来源

本文数据源于“中国药物专利数据库”1985－20xx年间公开的印度在华中药领域发明专利申请文献。wWW.meiword.COm主要通过ipc分类号a23l、a61k、a61p等结合地址“印度”来进行筛选,筛选出以天然动植物和矿物作为原料的专利申请文献共42件。国外补充数据源于欧洲专利局的esp@cenet世界专利数据库。有关数据统计均以“公开日”为准,同一专利申请人涉及不同名称的相关数据进行合并统计。

　2  统计结果及

2.1  文献数量

印度在华中药领域公开发明专利申请文献总计42件,其中授权量是5件,占全部公开申请的11.9%；pct申请为37件,占全部公开申请的88.1%,如表1所示。印度在华专利公开年限较晚,直至1998年才有1件申请公开,并在20xx年之后公开量才改变1～2件的状态增至8件,并有逐年增多趋势,见图1。

2.2  申请人类别

在公开的42件发明专利申请文献中,职务发明35件,占83.3%；非职务发明7件,占16.7%。职务发明申请具体分为企业3件、研究所31件、高校1件；授权职务发明为研究所3件、企业2件(见表2)。pct申请中,非职务发明申请为6件,职务发明申请为31件,包括企业1件、高校1件、研究所29件。表1  1998－20xx年印度在华中药领域发明专利的公开、授权、pct（略）表2  职务发明申请人排序（略）

2.3  应用领域

按应用领域的不同,全部专利申请文献具体可以分成：①药品类27件,包括草药提取物、组合物发明专利；②食品饮料类4件,包括软饮料2件、保健饮料1件、功能食品1件；③化妆品类1件,为化妆品用草本色料和香料；④方法类5件,包括制备方法4件、离析方法1件；⑤器械类1件,是溶液、敷布和绷带形式的止血抗菌产品；⑥其他4件,包括改善药物生物利用率的生物增强剂2件和应用于食品药品中的抗氧化剂2件。

2.4  有效成分

按有效成分入药形式的不同,印度在华中药领域发明专利申请具体有：①化合物6件；②提取物30件,其中单味药提取物19件、多味药提取物11件；③药材6件,其中单味药材1件、多味药材5件。其中药领域专利申请全部来源于植物,其中有效成分来源于中药材的专利申请为4件,中国相关植物(非中药材)来源的专利申请有10件,印度本土来源草药的专利申请有28件。典型的印度本土草药有stereospermum personatum (申请号：01823501、01823499)、piper longum(申请号：02830007)、柳叶优特力utleria solicifolia(申请号：02830202)、黄花假(申请号：02829021)、curcuma domestica valeton(申请号：02827077)、冬樱桃、黄细心和心叶青牛胆(申请号：02830173)等,其中冬樱桃是印度最为广泛使用的镇静剂中的一种,其在印度具有类似于人参在中国所具有的重要位置[4]。

2.5  适应症

按出现频次对全部申请专利进行适应症统计,具体结果为：内分泌、新陈代谢、营养保健17件,胃肠、口腔病学11件,神经、精神病学8件,免疫学7件,肿瘤学6件,心脑血管、淋巴管6件,传染病学6件,血液学4件,皮肤病学4件,肾病学、泌尿科学4件,骨骼、风湿、肌肉4件,肺病学、耳鼻喉科学4件,妇科学、男科学2件,寄生虫学1件,变态反应学1件。出现频次排在前4位的适应症分别为：①内分泌、新陈代谢、营养保健；②胃肠、口腔病学；③神经、精神病学；④免疫学。相应专利申请均达到7件。

　3  主要职务发明申请人概况

印度在华中药领域职务发明专利申请共35件,科学与工业研究委员会(印度科学与工业研究理事会,council of scientific and industrial research,csir)29件,强生有限公司2件,其他4家申请人公开量各为1件。强生有限公司是美国强生在印度的分公司。在有限的专利分布中,csir的比重达到了职务发明申请量的4/5以上。csir成立于1942年9月,隶属于印度联邦科学技术部。其职责是为印度提供科学与工业研究,推动印度经济、环境和社会利益的最大化。在管理上,csir采取理事会管理模式。csir主席由印度总理担任,副主席由科技部部长担任。csir是印度全国最大的研发机构。目前,理事会共建有38个国家级研究所(实验室)和39个研究站,均有很强的工业技术开发能力。csir现有雇员17 432人,其中科学与工程技术人员12 556人,60%以上具有博士学位,行政管理及辅助人员4 876人。csir目前已成为印度科技发展的主力军,每年都有大批新成果、新技术、新产品和新工艺问世,涵盖化工、医药、新材料、电子、清洁水、食品加工、航空航天、环境保护、石油加工等各个领域。

第四篇 芩连术苓散急性毒性实验研究_药学论文

【摘要】  目的对芩连术苓散进行小鼠灌胃的急性毒性实验，观察其安全性，为临床研究提供依据。方法以芩连术苓散最大浓度、最大体积对小鼠灌胃，测定其一日最大给药量。结果小鼠一日最大给药量为2.08g，相当于成人临床日用量的130倍。结论芩连术苓散较为安全，可供临床研究试用。

【关键词】  芩连术苓散; 急性毒性; 小鼠; 实验研究

乳婴腹泻是一种常见的慢性病症，若不及时控制，则可能导致患儿发育障碍，已将其列为儿科重要“四防病”之一。其中湿热型最为常见，且病程绵长迁延，治疗困难。本课题组根据临床经验，提出“婴病调母法”，以黄芩、黄连等为主药组成“芩连术苓散”治疗本病，取得满意疗效[1]。本实验通过对小鼠灌胃给药，观察芩连术苓散的急性毒性，评价其安全性，为临床研究提供依据。

　1 材料

1.1 药物芩连术苓散(批号20xx1022)由张仲景国医学院中药研究所提供，20 g/袋，每日临床推荐用量为40 g。实验前将本品配制成可供小鼠灌胃的最大浓度混悬液，每毫升相当于1.3 g生药。

1.2 动物km小鼠，一级，7周龄，体质量18～22 g，♀♂各半。南阳实验动物养殖场提供。

2 方法和结果

2.1 预实验[2] 在进行正式实验之前，我们首先做了预实验，以便为正式实验提供依据。wWw.meiword.cOM

小鼠12只，随机分为2组，♀♂各半。

给药组：以本品可供灌胃的最大浓度(1.3 g生药/ml)、小鼠灌胃可承受的最大体积(0.8 ml/20 g体重)，做一次灌胃给药。灌胃前禁食不禁水14 h，给药后常规饲养，观察3 d。

对照组：灌胃等量饮用水，余同给药组。

结果：小鼠全部存活，灌胃给药无法测出本品的半数致死量(ld50)，提示该药是安全的。

2.2 正式实验一日最大给药量测定[3]。

小鼠40只，随机分为2组，♀♂各半。

给药组：以本品可供小鼠灌胃的最大浓度(1.3 g生药/ml)，一次灌胃0.8 ml/20 g体重，连续2次，间隔6 h。灌胃前禁食不禁水14 h，间隔期间不供食，给药后常规饲养，观察7 d。

对照组：灌胃等量饮用水，余同给药组。

结果：① 给药前和给药后的第1，3，5，7天，分别测小鼠食量和体质量，数据以 ±s表示，进行paired-samples t test，用miscrosoft excel 20xx和spss 10.0处理，结果见表1～2;② 观察给药后小鼠的外表行动，反射活动，饮水量，大、小便情况，结果见表3。

　3 结论和讨论

实验结果表明，芩连术苓散急性毒性很小，通过灌胃给药无法测出ld50。其一日最大给药量为2.08 g生药，折合成人(50 kg)推荐临床日用量为130倍。一般认为[4]，按体重计算，小鼠1d最大给药量相当于临床日用量的100倍以上则较为安全，可以提供临床研究试用。

根据国家药品监督管理局1999年《中药新药药理毒理研究的技术要求》的有关规定，以及毒理学研究的一般原则[4]，单次给药量大于20 g生药/kg体重而实验动物不出现死亡者，可以认为该药是安全的。本次进行的实验证实，该制剂的最大耐受量大于104 g生药/kg体重，从而证明该制剂属于较安全的制剂。表1 芩连术苓散急性毒性实验小鼠体重变化(±s)表2 芩连术苓散急性毒性实验小鼠摄食量变化(±s)表3 芩连术苓散1d最大给药量实验小鼠反应情况

“- ”表示正常;“ ”表示在灌胃后的2 d内，精神萎靡，活动减少;“△”表示在灌胃后的2 d内，粪便褐色溏薄不成形

实验观察发现，小鼠灌胃后在食量、增重、粪便及精神状态方面，给药组与对照组相比，有一定的异常。灌胃后，给药组体重增加比对照组略少，但不明显(p>0.05)。3 d内，给药组食量明显减少(p<0.01);至第5天，食量渐趋正常(p<0.05);7 d后，食量恢复正常。我们原因，除满负荷灌胃操作外，药物本身也会在短时间内影响小鼠食欲。

【参考文献】

[1] 李书香.婴病调母法治疗乳婴慢性消化性腹泻疗效观察[j].辽宁中医杂志，20xx，33(8):979 .

[2] 王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法，第1版[m].上海：上海科学技术出版社，20xx:788.

[3] 国家药品监督管理局.中药新药研究的技术要求[s].1999：16.

[4] 谢秀琼.中药新制剂开发与应用，第2版[m].：卫生出版社，2000:540.

第五篇 附子配伍贝母对大鼠心、肝、肾脏毒性的实验研究_药学论文

        作者：刘萍，黄川锋，李玲，阮耀

【摘要】  目的研究附子配伍贝母对大鼠心、肝、肾功能和形态学的影响。方法取健康sd大鼠40只随机分为正常组(a组)、附子组(b组)、贝母组(c组)、附子与贝母合用组(d组)，每组10只。各组每日分别按2.5 g/kg灌胃给予生理盐水、附子煎液、贝母煎液、附子与贝母混合煎液，给药组浓度均为200 g/l。第14天停药，称重，采集心脏、肝脏及肾脏标本，计算体质量增长率及心、肝、肾脏指数并观察其形态学改变;心脏取血，测定各组血清ldh，ck，ast，alt，bun，cr含量。结果 体重增长率、肝脏指数各组间均无显著差异;心脏指数d组比a、b、c组有显著升高，肾脏指数d组比c组有显著升高;形态学方面各给药组心肌、肝脏、肾脏均可见不同程度的损伤;ast、alt的变化各组间无显著性差异，和a组相比，各组ldh明显升高，b组、d组bun、cr明显升高(p<0.05或p<0.01)。结论 给药剂量为2.5 g/kg时，单用附子、贝母对大鼠均有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性;附子与贝母配伍用药后对大鼠心、肝、肾脏毒性较单用组明显提高。

【关键词】  附子; 贝母; 中药; 十八反; 毒理学

“十八反”是中药药性理论的重要组成部分，是中医界沿袭数千年的用药禁忌，为历代医家所推崇，目前仍被《中国药典》和各类教科书所遵循。wWw.meiword.cOM但近年也有学者报道，部分相反、相畏中药在临床实践中使用后并未发现明显毒副作用，反而有相反相成的作用。因此，“十八反”也是现代药性理论研究争议的焦点问题。目前关于半蒌贝蔹及攻乌的研究较多[1～4]。附子(radix aconiti lateralis preparata)为毛莨科植物乌头(aconitum carmchaeli debx)的子根加工品，朱林平[5]认为附子与乌头同出一源，故其也不宜与此5味药物配伍。

本实验通过观察附子与贝母(fritillary)单用及配伍应用后大鼠体重增长率的变化、心、肝、肾脏器指数及形态学改变，检测心肌酶谱、肝功能、肾功能部分生化指标，从而对附子与贝母配伍是否具有毒性及毒性作用的靶器官进行探讨。

　1 材料

1.1 动物健康雄性sd大鼠，spf级，体质量180～200 g，购自华中科技大学同济医学院实验动物学部，合格证号scxk(鄂)20xx-0007。

1.2 仪器及设备bm-ⅷ生物组织包埋机、冷冻台(孝感市宏业医用仪器有限公司);dmr+q550型病理图像仪(德国leica公司);日本olympus万能显微镜;日立7179全自动生化仪。

1.3 药物白附片、贝母，购自河南省宛西制药股份有限公司仲景大药房，由南阳医学高等专科学校生药学袁国卿副教授鉴定。附子单煎40 min，贝母单煎20 min，附子与贝母配伍用药时先将白附片煎20 min后加入贝母合煎20 min。药物浓度均为200 g/l，晾凉后置于冰箱冷藏室中备用。

1.4 试剂ldh(乳酸脱氢酶，批号：071121)、ck(肌酸激酶，批号：080391)、alt(丙氨酰氨基转移酶，批号：080375)、ast(天门冬氨酸氨基转移酶，批号：080381)、bun(血清尿素氮，批号：071275)及cr(血肌酐，批号：080375)，均为中生北控生物科技股份有限公司生产。

2 方法

2.1 分组取sd大鼠40只，随机分为正常对照组(a组)、附子组(b组)、贝母组(c组)、附子与贝母合用组(d组)，每组10只，称重，标记。各组每日分别用灌胃法给予2.5 g/kg生理盐水、附子煎液、贝母煎液及附子与贝母混合煎液，各给药组浓度均为200 g/l。于4，8，12 d各称重一次并调整给药剂量。第14天停药，禁食不禁水12 h后，称重，用100 g/l的水合氯醛麻醉后，解剖、暴露出心脏，自左心室取血5 ml制备血清，测定各组血清ldh，ck，ast，alt，bun，cr含量;分离心脏、肝脏及肾脏，用生理盐水冲洗后称重，用中性缓冲福尔马林溶液固定，通过脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡he染色、脱水透明、封固，于光学显微镜下观察形态学改变。

2.2 统计方法实验数据采用spss13.0统计软件处理，结果以±s表示，组间比较采用f检验进行整体方差，方差齐者用q检验，方差不齐者用秩和检验，p<0.05有显著性差异，p<0.01有极显著性差异。

　3 结果

3.1 体质量及脏器指数(见表1)从表1可见，体质量增长率、肝脏指数各间均无显著差异(p>0.05)，d组心脏指数显著高于b、c组(p<0.01)，d组肾脏指数明显高于c组(p<0.05)。

表1 各组体质量增长率及心、肝、肾脏指数(±s)

3.2 形态学观察

3.2.1 心肌形态学见图1。对照组结构正常;附子组心肌间隙明显宽大，肌束细长，肌纤维粗细不等，少许区域肌浆有融合现象，间质中可见个别炎细胞浸润;贝母组心肌纤维之间间隙明显扩大，肌丝粗细不等，肌浆融合，间质出血，炎细胞浸润明显;附子+贝母组心肌肌束断裂，肌纤维结构消失，部分肌纤维融合，胞浆同质状，周边部蛋白液渗出，炎细胞浸润明显。

图1 各组心肌形态学改变(he，400×)

3.2.2 肝脏形态学见图2。对照组结构正常;附子组肝小叶结构略显紊乱，肝索上细胞排列不规则，可见较多慢性炎症细胞浸润，肝细胞水肿，细胞核大深染，可见双核;贝母组汇管区可见大量炎细胞浸润，部分肝细胞变性;附子+贝母组大部分小叶结构正常，可见2～3个细胞体积大，核大深染，并可见双核肝细胞。

3.2.3 肾脏形态学 见图3。对照组结构正常;附子组肾近曲小管上皮细胞水肿，界限不清，小血管扩张充血，间质可见蛋白样水肿液，间质炎细胞浸润明显;贝母组肾小球数目减少，管腔扭曲不规则，间质灶性纤维化，结构紊乱，炎细胞浸润明显;附子+贝母组肾小管明显扩张，视野可见肾小球玻璃样变性，内有出血，周边部可见少许内皮细胞，间质炎细胞浸润明显。

图2 各组肝脏形态学改变(he，400×)

3.3 生化指标结果见表2。与对照组相比，附子组ldh，bun，cr明显升高(p<0.05或p0.05)。

4 结论与讨论

脏器指数是反映药物对脏器影响，尤其是毒性的重要指标，测量脏器指数旨在从大体上寻求药物是否对心、肝、肾等重要器官有损伤。脏器指数增加表示脏器有充血、水肿、增生、肥大等变化，脏器指数下降则表示脏器有萎缩、退行性变化等[6]。生化检测选取ldh，ck，ast，alt，bun及cr为检测项目，与大体标本形态学及显微镜下形态结构的变化相互印证，寻找药物毒性作用的靶器官。ldh、ck活性常用来反映心肌受损的程度。alt为肝细胞损伤的灵敏指标，ast升高可提示心脏或肝脏受损。尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一，测定血液尿素的含量可以了解机体肾功能的状况，因1个尿素分子含有2个氮原子，可用bun(血清尿素氮)表示尿素含量。cr是肌酸代谢的终产物，由肾脏排出，它从肾小球滤过后不被肾小管再吸收，也不再分泌，其排出量较为恒定，不受食物中蛋白质含量的影响，测定血中cr的含量能较准确的反映肾脏的排泄功能。血清bun及cr升高提示肾脏的排泄功能减退[7]。

本实验中附子组大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。镜下可见附子组心肌有明显病变，加之ldh活性升高，说明有心肌损伤;肝脏病理改变提示肝细胞有再生现象，但alt、ast检测值与对照组相比无显著性差异，当肝炎损伤进入修复阶段时，即使尚残存较明显的肝脏病变，alt及ast可正常[8]，因此可解释为本实验在第14天进行检测时附子造成的肝脏急性损伤还未修复，而生化检测值已恢复正常;肾脏损伤病理改变明显，加之bun和cr含量与对照组相比升高较明显，与病理变化具一致性。本实验结果可推测，附子单用有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性，与向丽华等[6]报道一致。

图3 各组肾脏的形态学改变(he，400×)

本实验中贝母单用时大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。ldh活性与对照组相比明显升高，其他生化指标变化均不明显。但形态学观察发现心肌、肝脏、肾脏均有明显病理改变，据此可推测贝母组也有一定的心、肝及肾脏毒性。关于贝母毒理研究相对较少，检索文献仅见毒性实验研究，对其毒性机制的研究未见报道[9，10]，有待于进一步探讨。

表2 各组血清生化指标(±s)

附子与贝母合用组大鼠体质量增长率、肝脏指数与对照组比较未发现显著性差异，心脏指数较其他3组均有显著性提高，与镜下观察到心肌形态学改变一致，且ldh活性较对照组升高，可相互印证;虽alt及ast活性无变化，但形态学观察可提示有肝细胞有再生现象;肾脏指数较贝母单用有显著性差异，肾脏形态学观察病理改变明显，bun及cr含量较对照组明显升高，但与两药单用组差别不明显。因此附子、贝母配伍应用后心、肝、肾毒性较单用毒性明显提高。其机制可能与二药合煎后毒性成分乌头碱、次乌头以及新乌头碱的含量显著提高有关[11，12]，有待于进一步探讨。

【参考文献】

[1] 肖成荣，陈 鹏，王宇光，等.半蒌贝蔹及配伍乌头对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响[j].天津中医药，20xx,4:68.

[2] 关天增，孙顺霖，常，等.半蒌贝蔹及攻乌的实验研究[j].河南中医药学刊，1994，9(5):28.

[3] 杨 庆,聂淑琴,翁小刚,等.乌头、贝母单用及配伍应用体内、外抗肿瘤作用的实验研究[j].中国实验方剂学杂志,20xx,11(4):25.

[4] 肖志杰,黄 华,曾春华,等.附子配贝母对大鼠心功能的影响[j].江西中医学院学报,20xx，17(2): 50.

[5] 朱林平.附子毒性研究概况[j].江西中医药，20xx，35(6)：53.

[6] 向丽华,陈燕萍,张 智，等.24味有毒中药长期毒性实验对大鼠脏器指数的影响[j].中国中医基础医学杂志,20xx,12(1)：35.

[7] 沈岳奋.生物化学检验技术[m].:卫生出版社,20xx：117.

[8] 骆抗先.乙型肝炎基础和临床[m].:卫生出版社,20xx:365.

[9] 莫正纪,唐心耀,孙 中，等.引种栽培瓦布贝母、浓蜜贝母与野生川松贝母的药理作用比较研究[j] .中国中药杂志,1998,23(1):14.

[10] 苗明三,朱飞鹏,朱平生.实用中药毒理学[m].第二军医大学出版社,20xx:505.

[11] 边宝林,司 南,王宏洁,等.附子单煎以及与浙贝母合煎后乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等有毒成分的含量变化研究[j].中国实验方剂学杂志,20xx,12(4):9.

[12] 翁小刚,聂淑琴,黄璐琦.hplc测“半蒌贝蔹及攻乌”中乌头与其它诸药合煎前后次乌头碱的含量变化[j].中国药学杂志,20xx,39(1):57.

第六篇 中药抗小鼠Lewis肺癌实验研究进展_药学论文

【关键词】  中药；lewis肺癌；实验研究；综述

利用小鼠lewis肺癌细胞进行中药抗癌作用的研究,探索中医药对肺癌细胞生长与转移、细胞周期与细胞凋亡等遗传学与免疫学方面的研究,已成为中医药抗肺癌研究的重点领域之一。笔者查阅了1998年1月－20xx年1月由国家自然科学基金、国家新药基金及各省市中医药管理局、卫生厅、教育厅等资助的中药抗小鼠lewis肺癌作用研究文献,进行了详细的。现报道如下。

　1  复方研究

1.1  消积饮

该项研究为广东省中医药管理局科研基金资助课题(98-335),广州中医药大学第二临床医学院完成。消积饮由黄芪、补骨脂、云芝、大黄、白花蛇舌草、莪术、全蝎、蜈蚣8味中药组成,具有扶正培本、化瘀解毒的功效,经水煮醇沉制备成药液,相当于5 g原药材/ml。分别研究了该方对小鼠lewis肺癌细胞增殖核抗原(pcna)及细胞凋亡的影响、对肺癌细胞周期的影响、对肺癌生长和转移抑制的影响、对肺癌移植瘤抑制的影响。实验结果表明,消积饮能够抑制lewis肺癌的生长,其抑瘤率为43.09%,对lewis肺癌细胞周期入细胞内dna合成有很大的影响,有可能影响lewis肺癌细胞的基因表达,使g1期细胞不能通过细胞周期检测点进入s期而发生g0/g1期阻滞,阻断dna合成,干扰肺癌细胞周期的正常进行,从而抑制肺癌细胞的与增殖。Www.meiword.CoM使用该方后,lewis肺癌细胞凋亡指数显著降低,表明消积饮可通过影响肿瘤细胞凋亡而起到抗癌作用。对小鼠lewis肺癌生长和转移的抑制作用研究表明,消积饮能抑制lewis肺癌的生长及发生转移,其效果不仅表现在皮下肿瘤重量减小、肺转移率降低,还表现为肺转移结节数目减少[1-7]。

1.2  长必安胶囊

该项研究为浙江省中医药管理局新药开发基金资助项目,浙江省中医药研究院基础实验研究所完成。长必安胶囊由龟甲、鳖甲、黄芪、白术等7味药物组成,为棕褐色粉末,含5.54 g原药材/g,具有益气养阴、行气活血、祛瘀生新的功效。戴氏等[8]从扶正和祛邪两个方面观察了本品对lewis肺癌小鼠肺转移及t淋巴细胞转化功能、干扰素γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)含量的影响。实验结果表明,本品可明显提高荷瘤机体的细胞免疫功能,增加ifn-γ和tnf-α含量,并具有较好的量效关系；对lewis肺癌有一定的抑制作用,但抑瘤率在30%以下,祛邪作用不强；对lewis肺癌肺转移具有明显的抑制作用,肺转移的抑制率达18.2%,肺转移灶数抑制率达20.7%～56.5%。本品可作为抗肿瘤的辅助治疗药,用于肿瘤患者放化疗后的辅助治疗。

1.3  承气生血方

该项研究为中医药大学课题资助项目(g20xx-12),由中医药大学基础医学院等完成。承气生血方为民间流传的治疗恶性肿瘤组方,临床用于治疗肿瘤患者气血两虚证取得较为满意的疗效。承气活血方由天花粉、雄黄、大黄、柴胡、牛黄、当归、甘草等组成,具有清热祛痰、活血解毒等功效。唐氏等[9-10]通过流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率,结合荧光显微镜观察凋亡细胞及凋亡小体的形态变化,结果表明,该方是能通过诱导肿瘤细胞凋亡来抑制小鼠lewis肺癌肿瘤细胞的生长。提示承气生血方具有抗肿瘤的作用。对小鼠lewis肺癌肿瘤生长与抑制作用的研究结果表明,其1.2 g/(kg·d)组对肿瘤生长的抑制率为36.12%,1.2 g/(kg·d)与0.6 g/(kg·d)2组的肿瘤转移抑制率分别为60%和62.5%,效果虽然不如西药环磷酰胺(生长抑制率89.20%,转移抑制率90%),但其扶正作用仍值得进一步研究。

1.4  十全大补汤

该项研究为浙江省中医药管理局资助项目(20xx-57),浙江中医学院与浙江省中医院完成。十全大补汤含黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、熟地黄、白芍、川芎、当归,具有温补气血的功效,临床用于治疗气血两虚证。包氏等[11]研究观察了十全大补汤对小鼠lewis肺癌转移的影响,将十全大补汤分为高、中、低3个剂量组,并与阿霉素组进行比较,结果表明以上4组在抑瘤率实验中差异无统计学意义；对小鼠lewis肺癌肺内转移的抑制作用结果表明,以上4组与生理盐水组比较,均表现为转移瘤结节数减少,结节较小,结节较为孤立。十全大补汤3组虽然结节数量多于阿霉素组,但差异无统计学意义。十全大补汤能显著抑制lewis肺癌肿瘤的生长、抑制肿瘤转移。

1.5  金安粉针剂

该项目为国家新药基金项目2000(96-905-05-261),中医药大学与中国中医科学院广安门医院共同完成。金安粉针剂由苦参、黄芪、川芎等组成(深圳海王制药公司生产),具有扶正培本、益气活血、清热解毒的作用。周氏等[12-13]利用小鼠lewis肺癌细胞造模,研究了肺癌小鼠的体重曲线变化、抑瘤率、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率、tunel法观察了肿瘤组织病理学变化。结果表明,lewis肺癌小鼠体重变化曲线本品与环磷酰胺组比较差异有统计学意义,金安粉针组针组体重减轻少,小鼠毛顺光滑有光泽；在c57bl/6j小鼠能显著抑制肿癌的生长,并能提高其生存质量；金安粉针对lewis肺癌细胞周期的影响是使细胞g2-m期细胞减少,并诱导部分细胞凋亡；金安粉针组除肿瘤组织有成片核碎裂外,组织内微血管也非常少,微血管的减少可导致组织缺血缺氧而继发细胞凋亡,或者是通过对病灶内血管生成抑制作用,引起肿瘤细胞凋亡。以顺铂为对照组进行研究,也验证了以上结果。

1.6  益气平悬饮

该项目为国家中医药管理局基金资助项目(02-03jp30)与湖南省自然科学基金资助项目(01jj2037),由湖南省肿瘤医院与湖南中医学院共同完成。益气平悬饮为清代费伯雄方,由人参、生黄芪、椒目、桑白皮、葶苈子、瓜蒌壳、半夏、黄芩、郁金、茯苓、刺蒺藜、蚤休、甘草等组成,具有益气温阳、利肺泄水的功效,经水煎醇沉法,制成含量为2 g原药材/ml。王氏等[14]观察了本品对小鼠lewis肺癌组织细胞中il-2、tgf-β1 mrna表达的影响。结果表明本品大、小剂量组lewis肺癌组织细胞中的il-2 mrna表达水平明显高于模型组与化疗组,而本品大、小剂量组间差异无统计学意义；本品大、小剂量组tgf-β1 mrna表达水平明显低于模型组与化疗组,大小剂量组间差异无统计学意义。结果表明,益气平悬钦能促进小鼠lewis肺癌细胞中il-2 mrna的表达,抑制tgf-β1 mrna,纠正了th1/th2的漂移,进而纠正免疫微环境的紊乱,是本品抑制lewis肺癌生长的分子学机制之一。

1.7  健脾益肺化淤方

该项目为广东省中医药管理局资助项目(2040030),暨南大学医学院完成。健脾益肺化淤方由党参、黄芪、仙鹤草、薏苡仁等组成,具有健脾益肺、化瘀解毒的功效。孟氏等[15]观察本方对小鼠lewis肺癌的抑瘤作用与对免疫器官的影响。结果表明,本品高、中剂量组有明显的抑瘤作用,高剂量与顺铂联合应用,抑瘤效果更为显著。本品对小鼠的进食、活动、饮食影响较小,有效剂量下对胸腺有抑制作用,用药后胸腺明显萎缩,而脾脏指数轻度增加。结果表明,本品与化疗药物联合应用,有明显的协同增效作用,在肺癌的临床治疗过程中,灵活应用健脾益肺、培土生金法能有效改善患者症状,提高疗效。

1.8  乌三颗粒

该项目为重庆市科委(1999)与四川省教委青年基金重点资助项目(2000-a71),由第三军医大学成都军医学院与成都中医药大学共同完成。乌三颗粒为复方三类中药新药,由制何首乌、三七、红参、土鳖虫、大青叶组成,重庆华森制药有限公司生产。该项目在基因组水平上探讨乌三颗粒抗肿瘤的分子生物学机制,抽取经乌三颗粒治疗lewis肺癌组织和未经治疗的对照组瘤组织总rna并纯化mrna,分别反转录并进行荧光标记,制作成cd-na探针,与小鼠mgec-20s型基因芯片杂交,筛选出2组间差异表达基因。结果表明,2组间存在差异性表达基因45条,与对照组比较,本品组与恶性肿瘤浸润、转移相关基因表达下调,与促进细胞凋亡的相关基因表达上调。基因芯片技术能高通量中药乌三颗粒防治lewis肺癌的相关靶基因,为进一步揭示中药抗肿瘤机制提供了新的思路和前沿性生物技术手段[16]。

1.9  固本抑瘤ⅱ号

该项目为市科委资助项目(h010910190119),市中医研究所等单位完成。固本抑瘤ⅱ号由党参、茯苓、白术、生黄芪、鸡血藤、莪术、川芎、苦参、女贞子、浙贝母等12味药物组成,具有益气活血功效,是市中医医院针对肿瘤患者,尤其是气虚血瘀证肿瘤患者研制的中药。张氏等[17]观察了本品对lewis肺癌荷瘤小鼠的免疫功能的影响,结果表明本品可通过提高nk细胞、b淋巴细胞活性,巨噬细胞吞噬功能,升高血色素,改善贫血,提高荷瘤小鼠的特异性免疫功能；且本品具有显著延长荷瘤小鼠生存时间的作用。本实验结果与临床疗效相符。

1.10  肺瘤平膏

该项目为国家自然科学基金项目(30371821),中国中医科学院广安门医院完成。肺瘤平膏(又称益气活血解毒方)由白花蛇舌草、拳参、败酱草、草河车、败酱草、黄芪、西洋参、沙参、麦冬、桃仁、三七等组成,具有扶正培本、解毒抗癌、活血化瘀的功效。郑氏等[18]观察了肺瘤平膏及其拆方(将本品拆分为解毒方、益气方、益气解毒方)对lewis肺癌移植瘤的抑瘤作用及对s-100蛋白和血管内皮细胞生长因子(vegf)表达的影响。实验结果表明,肺癌组织中的vegf表达与树突浸润(dc)含量成负相关,即随着肺癌组织中vegf表达的增强,其s-100蛋白密度均明显降低。其中益气方组s-100蛋白表达最高,解毒方组vegf表达量最高,而益气解毒活血方组s-100蛋白表达较高,vegf表达较低,表明本品可能一方面抑制血管生成,另一方面促使dc成熟,促进机体对癌细胞产生有效的免疫应答,相关工作有待进一步深入。

1.11  益气活血解毒方药

辽宁省教育厅资助项目(99152133),辽宁中医学院完成。益气活血解毒方药含红参、黄芪、莪术、桃仁、白花蛇舌草、天花粉、半枝莲、仙鹤草等组成,具有益气活血解毒功效。王氏等[19]观察了益气活血解毒方药对小鼠lewis肺癌微血管密度的影响。结果表明,本方能明显减少肿瘤中微血管数目及癌细胞对血管的侵袭能力,其对肿瘤的抑制作用可能是通过抑制肿瘤间质内毛细血管的生成来抑制肿瘤的生长,同时减少血行扩散的途径来达到抑制肿瘤扩散的目的[19]。

1.12  益肺颗粒

该项目为杭州市卫生局青年基金资助项目(9803),杭州市中医院与浙江省中医药研究院共同完成。益肺颗粒由南沙参、北沙参、黄芪、炙鳖甲、半边莲、半枝莲、白花蛇舌草等组成,临床用于预防非小细胞肺癌术后转移疗效确切。张氏等[20]采用皮下接种lewis肺癌模型,观察了益肺颗粒对小鼠瘤重及肺转移灶的影响、血白细胞的变化、小鼠免疫器官重量系数及t淋巴细胞亚群的变化,并进行了毒性试验。结果表明,本品对lewis肺癌皮下移植瘤及肺转移灶均有明显的抑制作用,与环磷酰胺合用具有显著抑制作用；可明显升高血白细胞,抑制胸腺增生,cd4明显升高,cd8值下降,cd4/cd8值显著升高。并且本品未出现明显的不良反应,最大耐受量相当于成人用量的112倍。本品对lewis肺癌有抑制作用,并有增效减毒和免疫调节作用。

1.13  益肺抗瘤饮

该项目为上海市“八五”攻关项目(859190102),上海中医药大学附属龙华医院完成。益肺抗瘤饮由黄芪、北沙参、天冬、女贞子、七叶一枝花等药物组成,具有扶正祛邪作用。朱氏等[21]观察了本品对lewis肺癌荷瘤小鼠神经内分泌免疫的实验研究。结果表明,本品能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,增加体重,提高自然杀伤细胞、lak细胞、il-2水平,降低β-内啡肽、雌二醇水平,其抑瘤作用机理除与提高细胞免疫功能外,还与降低β-内啡肽、雌二醇的水平有关。

1.14  异功化瘤颗粒

该项目为四川省科技厅资助课题,成都中医药大学基础医学院完成。异功化瘤颗粒由养阴扶正的药物组成。肖氏等[22]观察了本品对lewis肺癌的抑制作用,结果表明,大剂量(21.6 g/kg)和中剂量(10.8 g/kg)有明显抑瘤作用。

2  中药化学成分研究

2.1  紫杉醇

该项目为湖北省自然科学基金(94j080)与湖北省科委重点科研课题资助项目(962p1106),湖北医科大学完成。紫杉醇是一种从太平洋紫杉属短叶紫杉茎皮中提取的抗肿瘤药物,属于细胞周期g2/m期阻滞剂,并能诱导肿瘤细胞凋亡。本项研究探讨了紫杉醇对lewis肺癌的抑制作用机理,对lewis肺癌细胞增殖、对细胞核形态dna含量及核仁组成区嗜银蛋白(agnors)的影响。实验结果证实了紫杉醇可明显抑制小鼠对lewis肺癌的生长和转移,并诱导肿瘤细胞凋亡；紫杉醇对lewis肺癌细胸增殖有抑制作用,并且疗效优于il-4,但紫杉醇单用毒性较大,与il-4合用,可减轻毒性,增加疗效[23-25]。辽宁中医药大学[(国家自然科学基金资助项目(30572415)]进行了联合紫杉醇对lewis肺癌一般状态及抑瘤率影响的实验研究,分别采用、药物及针药结合对lewis肺癌小鼠模型进行治疗,观察小鼠的生存状态、肿瘤体积的动态变化、瘤重及抑瘤率。结果表明,联合紫杉醇具有良好的抑瘤作用,并能改善动物的生存状态,其作用优于单用紫杉醇或单用[26-27]。

2.2  康莱特注射液

该项目为浙江省中医药管理局基金资助项目(20xxc065)。探讨了本品对lewis肺癌小鼠血管内皮细胞生长因子(vegf-c)蛋白及mrna表达的影响,对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。vegf-c蛋白的阳性表达和血管形成正相关,血管形成和肿瘤复发转移具有一致性。实验结果表明,该药高、中、低剂量组的vegf-c蛋白阳性细胞数降低,以高剂量组最为明显,提示本品可降低vegf-c蛋白的阳性表达,减少肿瘤血管形成及肿瘤营养供应,对防止肿瘤复发转移有积极的意义,是防止肿瘤复发转移的可能机制靶点。免疫功能结果表明,本品可明显提高lewis肺癌小鼠的脾、胸腺指数,高剂量组能明显降低tnf-α、il-1、il-6在外周血中的含量,在杀灭肿瘤细胞的同时,对机体免疫器官及免疫功能有保护作用[28]。

2.3  金荞麦

金荞麦为蓼科植物天荞麦的根状茎,主要含有羟基蒽醌类、野荞麦苷、双聚原矢车菊苷元等。中医药大学基础医学院与中国中医科学院广安门医院(国家中医药管理局资助项目2000-j-b-02)采用流式细胞术、免疫组化法检测、观察了咸麦宁(金荞麦干燥根茎提取的单宁类化合物)对小鼠lewis肺癌细胞周期及cyclin d1表达的影响,结果表明,咸麦宁可能过降低肿瘤细胞cyclin d1的表达,将肿瘤细胞阻止于g0-g1期,使细胞不能进入s期进行dna复制,从而抑制肿瘤的生长[29]。浙江温州医学院等(香港百草堂有限公司、香港保健协会研究项目)进行了金荞麦fr4(金荞麦抗癌作用有效部分之一)对小鼠lewis肺癌细胞组织基质金属蛋白酶-9(mmp-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(timp-1)蛋白表达的影响,结果表明,金荞麦fr4在400 mg/kg剂量时可明显抑制小鼠lewis肺癌生长,可下调mmp-9的表达,但不影响timp-1活性,其抗肿瘤的分子机制可能与下调mmp-9表达有关[30]。

2.4  槲皮素

中南大学湘雅三医院(湖南省卫生厅科研基金资助项目c20xx033)与南京医科大学公共卫生学院(江苏省高校省级重点实验室基金资助项目)分别进行了槲皮素、槲皮素与川芎嗪合用对小鼠lewis肺癌生长的抑制作用。实验结果表明,槲皮素与川芎嗪合用可明显抑制lewis肺癌移植瘤的生长,其作用机制与抑制血管生成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关,槲皮素与顺铂联合应用也可提高抑瘤疗效[31-32]。

2.5  魟鱼软骨多糖

魟鱼软骨多糖是魟鱼软骨经盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、sephadex凝胶柱层析分离纯化获得的单一多糖,辽宁医学院附属第一医院[辽宁省教育厅资助项目(20xx73371)]探讨了魟鱼软骨多糖对小鼠lewis肺癌作用的分子机制,用环磷酰胺作对比,计算原发瘤抑制率及肿瘤转移数,采用rt-pcr和westem blot检测原发瘤组织vegf、bfgfmrna和蛋白表达。结果表明,魟鱼软骨多糖能明显抑制小鼠lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤vegf、bfgfmrna和蛋白表达有关[33]。

2.6  金针菇多糖

金针菇多糖由金针菇子实体中提取,经分离和纯化而得,其多糖含量为68.67%,含葡萄糖、半乳糖、甘露糖和木糖。浙江省中医院[国家中医药管理局资助项目(93c022)]观察了本品对lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能,结果本品大、中、小3个剂量的平均抑瘤率为35.65%、39.88%、31.51%,平均抗转移率为45.03%、57.80%、36.85%,并能明显提高lewis肺癌小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能,对lewis肺癌小鼠脾细胞il-2的产生有不同程度的促进作用[34]。

2.7  青蒿素

青蒿素是1972年从中药青蒿中分离得到的具有抗疟作用的单体成分,多项研究表明青蒿素及其衍生物对多种肿瘤的生长具有抑制作用。第三军医大学新桥医院[国家自然科学基金资助项目(30371586)]探讨了青蒿素对小鼠lewis肺癌移植瘤生长和淋巴管生成的影响。结果表明,青蒿素组瘤内微淋巴管密度、肺湿重、肺转移发生率、肺转移结节均较低,存活率明显增加,表明青蒿素可有效抑制lewis肺癌淋巴管生成和肺转移,提高小鼠存活率[35]。

2.8  川芎嗪

重庆医科大学中医药学院[国家自然科学基金资助项目(300070915)],研究了川芎嗪注射液与丹参注射液对小鼠lewis肺癌生长抑制作用与抑制血管生成的关系,检测了小鼠lewis肺癌移植瘤体积、质量、肺转移灶数、肺瘤微血管密度(mvd)和vegf的表达。结果川芎嗪组肺癌移植瘤体积、质量、肺转移灶数、mvd和vegf的表达均显著降低,表明川芎嗪能明显抑制小鼠lewis肺癌移植瘤的生长和转移,其作用机制与抑制vegf的表达、抑制血管生成有关,而丹参注射液无明显作用[36]。

2.9  黄芪注射液

武汉大学与武汉武警湖北总队医院[湖北省自然科学基金资助(94j080)与湖北省科委重点科研课题资助(962p1106)]研究了黄芪注射液对lewis肺癌细胞核形态、dna含量及agnors计数的影响。利用图像仪对肿瘤细胞核形态、dna含量及agnors计数进行测量,结果表明,使用本品后肿瘤细胞体积缩小,生长受抑制,核dna含量降低,肿瘤增殖能力减弱；agnors颗粒增大,计数减少,颗粒混合型和单一型增多。细胞核形态参数据反映了细胞核的大小,dna含量的agnors反映了肿瘤细胞增殖的特点,分别从静态和动态功能两个方面对lewis肺癌的生长与分化提供了信息,并具有良好的相关性,黄芪注射液对lewis肺癌具有抑制作用[37]。

3  小结

本研究结果表明,中医药治疗肺癌越来越受到国家的重视,资助项目逐年递增,“十一五”期间也将中医药防治肺癌列为重大疾病项目,给予了大量资金资助。对以上复方进行统计,共使用的药味为57味,使用较多的药味为21味,其频次由高至低依次为黄芪、白花蛇舌草、茯苓、白术、川芎、莪术、甘草、红参、苦参、仙鹤草、女贞子、三七、当归、大黄、桃仁、鳖甲、北沙参、半枝莲、败酱草、天花粉、党参,治则功效主要为(频次由高到低)扶正培本、解毒、活血、益气、祛瘀、清热。中药抑制lewis肺癌的作用主要机理：抑制肿瘤细胞周期的dna合成,影响lewis肺癌细胞的基因表达,从而达到抑制肺癌细胞的与增殖；促进肿瘤细胞中il-2 mrna的表达,抑制tgf-β1 mrna,纠正th1/th2的漂移,纠正免疫微循环紊乱；降低lewis肺癌细胞凋亡指数,影响肿瘤细胞凋亡而起到抑制肿瘤作用；抑制lewis肺癌毛细血管生成,降低血管内皮细胞生长因子的表达,促使树突浸润成熟,微血管减少可导致肿瘤组织内缺血缺氧引起肿瘤细胞凋亡,由此减少由血行扩散而导致的肿瘤转移。提高小鼠lewis肺癌细胞免疫功能：增加tfn-r、il-1、il-2、il-6含量和tnf含量；增加脾脏指数,抑制胸腺增生,提高nk细胞、b淋巴细胞活性,提高巨噬细胞吞噬功能,升高cd4含量；升高血色素及白血胞数,改善贫血状态；降低β-内啡肽、雌二醇水平。同时,中药具有增效减毒作用,与化疗药物合用,可提高疗效,并降低化疗药的毒性。

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